從云南省安寧市史家莊村、云南省農業科學院園藝作物研究所的科技示范園(海拔 1900 m，年均溫度 19.3 ℃，年降水量 688.6 mm，無霜期 360 d)彩云紅梨園(樹齡 7 年，株行距 1 m×3.5 m，樹勢較好，總種植面積 350 畝)采集病果。梨果感病后，果面初期出現黑色點狀病斑，后病斑逐漸擴大，中心凹陷，上有呈同心輪紋狀排列的黑色點狀物。切開病斑，可見果實內部腐爛至果心。采用常規組織分離法分離病菌，進一步通過單孢分離獲得純培養菌株。經初步觀察，所獲菌株具有一致的菌落形態，從中選取代表菌株 ANCYH-1 進行后續研究。

　　采用分生孢子懸浮液(個)噴霧接種法進行離體果實無傷接種測定致病性，以噴灑無菌水處理的作為對照組。將接種后的梨果置于培養箱(28 ℃、相對濕度 (80±5)%、12 h 光照 / 12 h 黑暗)培養，每日觀察發病情況。接種后第 1 d，果面開始出現黑色小斑點，之后病斑逐漸擴大;接種后第 7 d，病斑擴大連接形成不規則型大病斑，梨果出現輕度腐爛，而對照組的梨果沒有出現任何癥狀。對接種后發病的梨果進行病菌再分離，得到的菌株形態與原接種菌株一致，符合柯赫氏法則，表明原接種菌株 ANCYH-1 是引起彩云紅梨炭疽病的病原。

　　對供試菌株進行形態學鑒定。在 PDA 培養基上，28 ℃條件下菌絲平均生長速率為19.3mm⋅d−1;氣生菌絲發達、致密，絨毛狀，白色與黑灰色交替，菌落背面可見黑灰色與白色相間的同心輪紋;子囊殼近球形或梨形，深棕色，具有孔口，內生棍棒狀子囊，子囊中有 8 個橢圓形子囊孢子;分生孢子盤大小為 (217.67~273.06) μm，基部聚生分生孢子梗，其上產生大量無色、單胞、棒狀分生孢子，大小為 (14.13~18.80) μm×(3.94~5.31) μm;附著胞基部與菌絲相連，淺棕色至深褐色或黑色，圓形或不規則形，邊緣完整或呈波浪狀，大小為 (10.28~15.03) μm×(7.40~11.12) μm。

　　對供試菌株進行分子生物學鑒定。以 ITS、ACT、TUB 和 CHS 這 4 個基因為靶標進行 PCR 擴增，將擴增產物測序，所得序列提交 GenBank，獲得登錄號分別為 OK483320(546bp)、OP932953(289bp)、OP941411(734bp)、OP941412(299bp)。利用這些序列在 NCBI 數據庫中進行 BLAST 比對，發現 ANCYH-1 菌株的 ITS、ACT、TUB 和 CHS 序列與 Colletotrichum fructicola 的模式菌株 CBS113000 相對應的基因序列 KC566781、KC566927、KC566203 和 KC566348 的同源性高達 99%~100%。利用 MEGA 7 中的最大似然法(Maximum-likelihood, ML)，以 ITS-ACT-TUB-CHS 多基因序列構建系統發育樹，結果表明，ANCYH-1 菌株與 Colletotrichum fructicola 的 4 個菌株單獨聚為一支，支持值達到 98%。結合菌落形態學特征及多基因序列分析結果，將 ANCYH-1 菌株鑒定為果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)。

　　本文對云南紅梨產區引起彩云紅梨炭疽病的病原進行分離和鑒定，確定該病由 C.fructicola 侵染引起，與 CHIO 等、KUANG 等、QING 等報道的 C.fructicola 具有一致的形態特征。本研究首次明確了彩云紅梨炭疽病的病原，并詳細描述了病害癥狀，為病害發生和流行規律的調查，以及病害監測和防控研究的開展奠定了基礎。研究結果對于保障云南省特色紅梨產業的健康發展具有重要意義。

何英云;王莉娜;楊光柱;張文;舒群;蘇俊,云南省農業科學院園藝作物研究所,202406